微生物检测很多人都不了解，微生物检测的生物化学试验更令人头疼接下来就让百检生物检测小编带您来了解一下吧
一、糖类代谢试验
一、糖类代谢试验
1.1糖（醇）类发酵试验
不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴别细菌。
大致可分为：
液体发酵管：无糖肉汤或蛋白胨水中，加入1%糖（醇）类指示剂，一支小玻管，经灭菌后备用。若被检细菌对营养要求较高时，则在试验前加入2%~5%无菌血清。
半固体发酵管：在液体糖（醇）发酵培养基中，加入0.3%~0.5%琼脂，溶化后分装试管，灭菌后让试管直立，使琼脂凝固，做成高层培养基，接种细菌应用接种针穿刺接种。固体发酵管：此类培养基一般不常用，仅用于营养要求较高的某些细菌，在含糖类及5%~10%血清琼脂斜面上进行发酵试验。另外固体高层糖发酵管，可用于厌氧细菌糖发酵试验，如产气芙膜杆菌在含糖的固体高层发酵管中出现汹涌发酵（产生大量气体）。
双糖（或三糖）高层斜面发酵管：这种培养基含有葡萄糖和乳糖（或再加蔗糖），这两种糖（或三种糖）混在一起，制成高层斜面，其中葡萄糖和乳糖（或蔗糖）比例为1：10。
各种糖（醇）发酵管含糖（醇）的浓度，一般为0.5%~1%，有时可达2%。经121℃20~30min灭菌，容易水解变质，特别是在碱性溶液中更易破坏。
故糖（醇）发酵培养基常用高压蒸汽115℃15min灭菌。
应用的糖（醇）种类很多：
单糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木胶糖、半乳糖；
单糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木胶糖、半乳糖；双糖：乳糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖；多糖：菊糖、肝糖、糊精、淀粉；醇：甘露醇、卫矛醇、山梨醇、侧金盏花醇、肌醇、丙三醇（甘油）；糖苷：水杨苷等。
最常用的指示剂有酚红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、酸性复红。
前两者颜色反应较敏感，但稳定性差，后二者比较稳定。特别是一些迟缓发酵的细菌，培养时间长，应用后二者指示剂。
酚红pH6.8（黄色）~pH8.4（红色）
1.2甲基红试验（methylred）
甲基红指示剂变色范围是pH4.4（红色）~pH6.2（黄色），产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，但又很快将丙酮酸脱羧，转化成醇等物质，则培养液的pH值仍在6.2以上，故此时加入甲基红指示剂，培养液呈黄色，此为阴性对照菌。阳性对照菌是大肠埃希氏菌，呈现红色为阳性。
1.3V-P试验
伏-普试验，目的是检查细菌是否能分解葡萄糖，产生乙酰甲基甲醇。
阳性对照菌是产气肠杆菌，分解葡萄糖（被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，36℃18~24h）
产生丙酮酸，再将丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下（乙液-40%KOH溶液），被氧化为二乙酰，与培养基蛋白胨中精氨酸等所含的瓜基结合，通常在10min内形成红色化合物。
若不显色，放置于50℃水浴2h，或放置于37℃培养箱中4h，充分摇动，观察培养液反应结果，不显红色为阴性，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。
1.4 ONPG试验
邻硝基酚-β-D-半乳糖苷的缩写，利用该试剂可以检查被检细菌有无β-半乳糖苷酶和渗透酶，发酵乳糖的细菌具有这两种酶。
渗透酶将乳糖分子带入菌细胞内，而β-半乳糖苷酶可将乳糖的β-半乳糖苷链切断，产生葡萄糖和半乳糖。
迟缓发酵乳糖的细菌，缺乏渗透酶，而ONPG渗入菌细胞内，被β-半乳糖苷酶分解产生邻位硝基苯酚，一般在20~30min内显黄色，为阳性，对照菌为枸橼酸盐杆菌和亚利桑那菌。
方法：将被检细菌接种到1%的乳糖肉汤琼脂培养基上，37℃培养过夜。取菌苔接种于0.25ml生理盐水中做成悬液。加入1滴甲苯，并充分振摇，使酶释放。在悬液中再加入ONPG液0.25ml，混匀，置于37℃培养箱或水浴箱中，分别在20min和3h后观察培养液反应结果不出现黄色者为阴性，对照菌是沙门氏菌。
1.5氧化发酵试验
测定糖类的氧化或发酵及糖类未被利用的代谢类型。
氧化型：细菌在分解葡萄糖过程中，必须有氧分子参加。无氧环境中不能分解葡萄糖。
发酵型：在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。
产碱型：不分解葡萄糖的细菌。
二、蛋白质、氨基酸及含氮化物代谢试验
2.1苯丙氨酸脱氨酶试验
原理：某些细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，可使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁发生整合作用，形成绿色络合物。
方法：将被检细菌的斜面培养物（先增菌）大量移种到苯丙氨酸琼脂斜面上，37℃培养18-
24h，再从斜面上滴加10%三氯化铁溶液4-5滴，使其自斜面培养物上缓缓流下，观察结果。
结果：溶液出现绿色为阳性，对照菌是变形杆菌；不变色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。
2.2脱羧酶试验
原理：某些细菌具有某种氨基酸的脱羧酶，可使氨基酸脱去羧基产生胺和二氧化碳，胺使pH值>7，此时指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为蓝色。
溴麝香草酚蓝酸性显黄色，碱性显紫色。
方法：将被检细菌接种到两支脱羧酶培养基中，其中一支不加氨基酸，另一支加赖氨酸/精氨酸/鸟氨酸，再在培养基上覆盖一层灭菌的液体石蜡，37℃培养18-24h，观察结果。结果：两管培养基均含有葡萄糖，产酸，溴麝香草酚蓝由蓝变黄。含有氨基酸的一管出现脱羧基降解作用，产生减性反应，溴麝香草酚蓝再由黄变蓝，为阳性。
鸟氨酸阴性对照菌为阴沟肠杆菌，显黄色。
2.3靛基质（明噪）试验
原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（引噪），靛基质与对二甲氨基苯甲醛结合，形成玫瑰红色化合物。
方法：将被检细菌接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24-48h后，滴加数滴试剂于培养基液面，轻轻摇动（不可剧烈振动），观察结果。
结果：出现红色为阳性，对照菌是大肠埃希氏菌；出现黄色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。
2.4硫化氢试验
原理：某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
方法：将被检细菌以接种针穿刺接种于醋酸铅或双糖铁培养基（乳糖+葡萄糖）中，37℃培养24h，观察结果。
结果：有黑色出现为阳性。
说明：在硫化氢试验的培养基加入硫代硫酸钠的作用是还原作用，以保持培养基处于还原状态，是产生的硫化氢不被氧化。
产硫化氢较少的菌种可在试管口放置醋酸铅试条。
2.5尿素酶试验
原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培养基中，分解尿素产生氮，使培养基呈碱性，此时培养基中的酚红指示剂显红色。
方法：将被检细菌接种的尿素固体斜面培养基上，36℃培养4h检查一次，再每天检查一次，培养5天，观察结果。
结果：出现红色为阳性，对照菌为变形杆菌；变色为阴性，对照菌是大肠埃希氏菌。百检网是第三方检测机构，提供微生物检测微生物检测,生物检测,生物类检测报告,生物检测标准,百检生物检测,药物检测,保健品检测专注于生物检测服务，做检测上百检生物检测,提供生物检测检测标准和生物类检测报告
